HPLC-Wissen kompakt

Tipps zum Gelingen von Methodentransfer

• Gerät A und Gerät B sind unterschiedlich – wie gehe ich vor?
• Wenn der Methodentransfer nicht „klappt“: Frage deinen Gesprächspartner gezielt diese Sachen
• „Do´s und dont´s“ beim Methodentransfer zur Vermeidung von späterem Ärger

Wie reinige ich meine Säule und meine Anlage am besten?

• Beste Lösungsmittel/-Kombinationen? Wann lohnt es sich bei einer C18-Säule nicht?
• Auch Mikroorganismen, Metallionen und eine „Schmierschicht“ können Ärger bereiten …
• Bewährte, schnell durchzuführende Spülprogramme

Die häufigsten Tücken bei der Probenvorbereitung

• Analytverlust bei der Probenvorbereitung – die wichtigsten Ursachen
• Die Art des Auflösens und die Wahl des Probelösungsmittels – Einfluss auf Peakform, Anzahl der Peaks und Reproduzierbarkeit der Peakfläche
• So vermeide ich Fehler beim Pipettieren und bei der Wahl der vials

Worin genau liegen die Unterschiede bei RP-Säulen?

• Welche 6 Säulen eignen sich als generisches Säulen-Portfolio bei der Methodenentwicklung einer unbekannten Probe? Warum gerade diese?
• Welcher Säulentyp „verträgt“ welchen Eluenten auf Dauer nicht?
• Kompakter Überblick über den aktuellen Säulenmarkt

Chromatogramme „richtig“ integrieren und bewerten

• Nichtaufgelöste Peaks, „winzige“ Peaks in der Nähe der Bestimmungsgrenze und/oder Basisliniendrift – wie soll ich „richtig“ integrieren: Lot fällen, „Valey to Valey“, Exponential Skim oder Tangente ziehen?
• Welche Einstell-Parameter beeinflussen wie stark Peakfläche, Peakform und Nachweisgrenze?
• Was bedeutet ein „zu“ kleiner Variationskoeffizient und welche Aktion sollte folgen?

Überprüfung der Robustheit – schnell und praxisnah

• Bei diesen chromatographischen Bedingungen kann diese Methode nicht robust sein
• Kritische Parameter, die oft unbemerkt bleiben
• Schema zur zügigen Überprüfung der Robustheit abhängig von der aktuellen Methode

RP-Eluenten – kompakt und praxisnah

• Wann Methanol und wann Acetonitril? Warum?
• Welche sind typische Fehler beim Ansetzen der mobilen Phase?
• Empfehlungen von bewährten Eluenten inkl. Modifier für bestimmte Substanzklassen

Theorie der HPLC – aus praktischer Sicht

• Die wichtigsten Begriffe aus der Theorie – knapp und verständlich erklärt
• Peaksymmetrie ungenügend – liegt es am pH-Wert oder an der Packungsqualität?
• Auflösung verbessern – was „bringt“ das meiste?

Wie erkenne ich Fehler und Schwachpunkte in Prüfvorschriften?

• Diese PV kann aus diesem Grund nicht funktionieren …
• Klassische Fehler beim Verfassen von PV´s
• Zahlreiche reale Beispiele

Das „erzählt“ mir das Chromatogramm!

• Erstaunlich viele Infos stecken im Chromatogramm – so schärfst du deinen Blick um diese zu „entdecken“
• Warum wandert Peak A aber nicht Peak B?
• Konstante Peakfläche aber nicht Peakhöhe – Ursachen und Regeln

Der pH-Wert und die Puffer in der HPLC

• Was genau bewirkt der pH-Wert und in welchem Ausmaß?
• Welchen Puffer und welche Pufferkonzentration soll ich verwenden – Vor-/Nachteile?
• Häufigste Ursachen für eine Verschiebung des pH-Wertes und deren Vermeidung

Temperatur – ein unterschätzter Parameter

• Wie beeinflusst die Temperatur Peakform, Peakfläche und Auflösung?
• In welchen Fällen lohnt es sich die Temperatur zu erniedrigen?
• Der besondere Einfluss der Temperatur auf kleine und große Moleküle und bei Gradiententrennungen